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TECHNICAL ARTICLESExpi293表達(dá)培養(yǎng)基并不直接兼容ProBond或Ni-NTA純化系統(tǒng)。我們推薦在用His標(biāo)簽的純化操作之前進(jìn)行一次緩沖體系交換或樣本透析。
大多數(shù)293細(xì)胞系均能適應(yīng)從傳統(tǒng)含血清或其它無血清培養(yǎng)基向Expi293表達(dá)培養(yǎng)基中的切換按照手冊(cè)中所描述的直接切換法或序貫切換法來操作,大多數(shù)293細(xì)胞系均能適應(yīng)從傳統(tǒng)含血清或其它無血清培養(yǎng)基向Expi293表達(dá)培養(yǎng)基中的切換。 注意:切換后的細(xì)胞可能無法達(dá)到與Expi293F細(xì)胞同等的高水平表達(dá)。
我們推薦使用pcDNA 3.4-TOPO TA載體(貨號(hào)A14697)。這一載體含有天然的全長CMV啟動(dòng)子和克隆位點(diǎn)下游的WPRE(旱獺轉(zhuǎn)錄后調(diào)控元件),這兩個(gè)元件均有利于基因的高水平表達(dá)(表達(dá)比pcDNA3.3 TOPO載體高大約2-3倍,而后者又比標(biāo)準(zhǔn)的pcDNA載體高2-5倍)。當(dāng)然,實(shí)際表達(dá)水平還要視具體蛋白而定。
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